血管內(nèi)支架薄截面顯微試樣的制備

    支架是用一種鎳鈦合金制造的。對于不同的支架設(shè)計(jì)、材料、表面涂層，正確的制備技術(shù)將會增強(qiáng)對細(xì)胞組織對臨床安裝支架（特別是在細(xì)胞組織與支架的界面處）的反應(yīng)。此外，它還可以對擴(kuò)展特性進(jìn)行周密的評估。這種觀察甚至能導(dǎo)致研制出經(jīng)過改進(jìn)的支架設(shè)計(jì)。

為此我們將我們的全部制備經(jīng)驗(yàn)進(jìn)行詳盡介紹。

試樣制備步驟

1. 切除安裝有支架的動脈，用鹽水沖洗并浸入鹽水中固定兩小時。

2. 取薄切片之前先將安裝有支架的動脈進(jìn)行鑲嵌。EpoThin?，是一個非常好的選擇，收縮率最小，在取薄切片的過程中不會使鑲嵌材料發(fā)生軟化，一種低粘度環(huán)氧樹脂。

3. 在用精密切割機(jī)進(jìn)行切割前，先用600號（P1200）和120號（P2500）CarbiMet?碳化硅砂紙，在MetaServ? 2000型磨光/拋光機(jī)或類似的設(shè)備上將鑲嵌好的試樣端面磨光。

4. 用接觸粘合劑將磨光表面粘接在承物玻璃片上。用 perspex (一種介電有機(jī)玻璃) 做的承物片對鑲嵌截面可提供比普通承物玻璃片更大的粘合力。不過，用 600號（P1200）CarbiMet? 碳化硅砂紙對普通承物玻璃片進(jìn)行預(yù)磨光也能改善其粘合性能。

5. 選擇一種能使切割損耗最小的切割片進(jìn)行切割。粘接了立方氮化硼的 IsoCut? 型薄切割片能夠在每15 mm 的支架上能再現(xiàn)地切割出28至30個截面。

6. 將經(jīng)過鑲嵌的試樣裝在 IsoMet? 型精密切割機(jī)上夾住。從試樣承物玻璃片一端截取50 至100μm 厚的截面。

7. 重復(fù)步驟3和4，制備下一個截面的表面。重復(fù)這一過程并將陸續(xù)得到的截面分別粘接在承物玻璃片上。

8. 用一系列的CarbiMet? SiC砂紙磨光，先從320號 (P400) 砂紙開始，接著使用360號 (P500)、400號(P800)、600號(P1200)、1200號(P2500)砂紙，將每個截面磨光至厚度為10–20 μm。磨光時要仔細(xì)，避免使材料去除過快和不均勻，這樣固定在砂紙紙基上的SiC磨料顆粒不至于嵌入試樣中的細(xì)胞組織部分。

9. 用3 μm 的 UltraPrep? A 型金剛石研磨薄膜進(jìn)行拋光，然后就可以進(jìn)行顯微觀察。

自動化制備設(shè)備/特殊夾具

用手工方法磨薄截面試樣也容易將試樣磨偏，試樣應(yīng)當(dāng)磨光至5 μm 并且厚度均勻。表面和厚度不均勻的截面試樣不能為組織化學(xué)分析提供最佳的條件。為了避免這樣的問題發(fā)生，可以使用組織學(xué)精密磨光夾具 (產(chǎn)品編號60-8087) 具有用碳化物做的止動裝置。夾具適用的承物玻璃片尺寸為27 x 46mm。

大多數(shù)半自動磨光/拋光機(jī)再加上巖相學(xué)和組織學(xué)用的薄截面承物片夾持器 (產(chǎn)品編號69-158)并使用單獨(dú)加載方式，就可以使磨光過程自動化。

專家建議

    在此，建議使用便攜式BioThin?型薄截面切割裝置(產(chǎn)品編號38- 2100)用來切割厚度為5μm的截面。這個全封閉系統(tǒng)使用滾珠軸承來控制所施加力的大小和承物片的定位。對于染色前的最終減薄，建議使用磨料尺寸為3μm 的 UltraPrep? A 型金剛石研磨薄膜。

設(shè)備*

Cast N’ Vac 型真空澆注系統(tǒng)

IsoMet? 系列線性精密切割機(jī)

MetaServ? 2000型磨光/拋光機(jī)